青黛水飞炮炙方法的研究
2018-04-08 11:16
青黛水飞炮炙方法古代应用较多，现代一些书籍虽有记载，但近年来未见青黛水飞炮炙方法的报道。各版《中国药典》对该品也未规定水飞，故临床应用均以产地加工品直接入药。笔者在师承期间炮炙青黛时采用了水飞，为探讨其方法的科学性，进行了青黛水飞前后的定性、定量分析。现报道如下：
1 材料与仪器
药材：1、2、3号药材分别从本市省药材公司、九芝堂股份有限公司、金沙大药房东塘连锁店购进，经【性状】、【鉴别】 定性鉴定，均为《中国药典》2000年版一部(下简称《药典》)收载的品种。对照品：中国生物制品检定所，靛蓝(定量)－9403；靛玉红(定性)－9402。试剂：均为分析纯。仪器：双图牌Hc-Tp11-50架盘药物天平(Max:5000g；e=d=5g)(上海第二天平仪器厂)；UV-2501PC分光光度计(日本岛津)；ES-J120电子分析天平(沈阳龙腾电子称量仪器有限公司)，等。
2 方法与结果
2.1 药材的炮炙：3个药材均照《药典》附录ⅡD药材炮制通则项下的水飞法操作。将3个药材分别加入15.0kg饮用水(锅炉房开水冷至冷水后)，搅散，使之全部混悬于水中，再加饮用水5.0kg，搅动，静置1min；倾取上层混悬液，再于沉淀中加入20.0kg饮用水，照前法操作，合并混悬液，静置1h，倾取上清液约30kg(照此法操作3次)，用10.0kg该液反复水飞该液的沉淀9次，合并混悬液，沉淀15h，虹吸并弃去上清液，将沉淀置不锈钢盘中，于80℃±1℃干燥，碾散即得。另将不能混悬于水的杂质同前温干燥。结果见表1。
表1 青黛水飞前后外观性状及定量检测结果
|
样品编号 |
取样量(g) |
水飞(%) |
样 品 性 状 |
|||
|
出品率 |
杂质 |
损失 |
水 飞 前 |
水 飞 后 |
||
|
1 |
5000 |
86.0 |
9.4 |
4.6 |
粉末，深蓝 |
粉末，深蓝+ |
|
2 |
5000 |
87.6 |
8.1 |
4.3 |
粉末，深蓝+ |
粉末，深蓝++ |
|
3 |
5000 |
82.3 |
13.9 |
3.8 |
粉末，深蓝++ |
粉末，深蓝+++ |
注：+~+++表示程度加强
2.2 靛蓝含量测定
2.2.1 标准曲线的制定
对照品溶液的制备：取靛蓝对照品20mg，精 密称定，置锥形瓶中，缓缓加入H2SO415mL，用玻棒轻轻搅匀，置80℃水浴中磺化1h，随时搅拌，取出，冷却。将溶液缓缓移入盛有适量水的200mL量瓶中，用水洗涤容器及残渣，洗液并入量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL，置50mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。(每毫升含靛蓝10μg）。
标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1.0、
2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置10mL量瓶中，加水至刻度，照UV法在610nm处测定吸收度(A)，同时作空白。回归方程：C=0.0129A+0.0000124，r=0.9998。
2.2.2 样品靛蓝含量的测定：取各供试品0.4g，精密称定，照对照品溶液制备项下方法，自“置锥形瓶中”起，至“精密吸取续滤液5mL”，置50mL或100mL量瓶中(使A在0.20~0.45之间)，加水至刻度，摇匀，在610nm处测定A(图谱见图1)，计算，即得。结果见表2。
表2 青黛水飞前后定量测定结果 (n=3)
|
样 品 |
靛蓝含量(%) |
石灰含量(%) |
灰分含量(%) |
pH值 |
||||
|
水 飞 前 |
水 飞 后 |
水 飞 前 |
水 飞 后 |
水 飞 前 |
水 飞 后 |
水 飞 前 |
水 飞 后 |
|
|
1 |
2.59±0.01 |
3.01±0.01 |
39.86±0.34 |
27.32±0.07 |
71.51±0.18 |
71.38±0.12 |
10.25±0.00 |
10.13±0.00 |
|
2 |
2.40±0.01 |
2.66±0.01 |
49.66±0.15 |
35.67±0.25 |
62.33±0.24 |
60.47±0.05 |
10.15±0.00 |
9.58±0.00 |
|
3 |
2.33±0.01 |
2.62±0.01 |
47.86±0.29 |
34.53±0.34 |
69.11±0.04 |
69.01±0.06 |
10.46±0.00 |
9.78±0.00 |
均为干燥品。
2.2.3 靛蓝回收率测定：采用加样回收实验，准确称取已知含量的供试品适量，分别加入靛蓝对照品，按样品含量测定方法测定，计算回收率。结果见表3。
表3 靛蓝样品回收率测定结果
|
n |
加入量(mg) |
测得量(mg) |
回收率(%) |
|
1 |
2.20 |
2.18 |
99.1 |
|
2 |
2.41 |
2.39 |
99.2 |
|
3 |
2.52 |
2.50 |
99.2 |
2.3 pH值的测定：取各供试品0.5g，精密称定，加水20.0mL，摇匀，放置30min，滤过，取滤液照《药典》附录VⅡG测定。结果见表2。
2.4 灰分的测定：取各供试品0.5g，精密称定，照《药典》附录ⅨK操作及测定，所得灰分，保存备用。结果见表2。
2.5 石灰含量的测定
2.5.1 石灰含量：取各供试品灰分测定项下的残渣，加稀HCl15mL使溶解，转移到50mL量瓶中，加热使完全溶解，加水至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液5mL，加水25mL，加0.025%甲基红乙醇溶液1滴，滴加KOH试液至溶液显微黄色，再继续多加5mL，加钙黄绿指示剂少量，用乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)滴定液(0.05mol/L)滴定，至溶液的黄绿色荧光消失，并显橙色。(每毫升EDTA-Na2滴定液(0.05mol/L)相当于3.705mg的Ca(OH)2)。结果见表2。
2.5.2 样品回收率测定：采用加样回收实验，准确称取已知含量的供试品适量，分别加入已知含量的定量Ca(OH)2，按样品含量测定方法测定，计算回收率，结果见表4。
表4 石灰样品回收率测定结果
|
n |
加入量(g) |
测得量(g) |
回收率(%) |
|
1 |
0.1010 |
0.1009 |
99.90 |
|
2 |
0.1018 |
0.1014 |
99.60 |
|
3 |
0.1117 |
0.1119 |
100.17 |
2.6 吸附TLC：取各供试品50mg，加氯仿5mL，充分搅拌，滤过，作为供试品溶液。另取靛蓝、靛玉红对照品，分别制成每毫升含1mg的溶液作为对照品溶液。照《药典》附录Ⅵ B TLC法试验，吸取上述8种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯－氯仿－丙酮(5:4:1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝色(靛蓝)和浅红色(靛玉红)的斑点。其色谱见图2。
3 讨论及结论
3.1 古代青黛的水飞炮炙：水飞(宋.《疮疡经验全书》)；澄去灰土(明.《证治准绳》)；水飞去脚，缘中有石灰，入服食药中宜飞净用(明.《炮炙大法》)；干靛多夹石灰，须淘之数次，取浮标用(明.《本草通玄》)；水澄(清.《痧胀玉衡》)等。可见宋至清代均采用了水飞方法。
3.2 有效成分不溶于水：青黛的主要成分明确(主含靛蓝，并含靛玉红等)。“具有清热解毒作用的中药青黛即粗制靛蓝”。而靛蓝是青黛的主要成分，由靛苷经碱(或酸)水解后生成的苷元——吲哚醇在空气中被氧化成暗蓝色的缩合产物。靛蓝与靛玉红互为异构体。苷元一般呈亲脂性，故青黛主要成分不溶于水。从水飞前后靛蓝含量测定的结果表明，水飞法对其有效成分无损失。
3.3 减少了杂质、提高了靛蓝含量：水飞后3个样品的靛蓝含量提高了10.83%~16.22%、石灰含量减少了27.85%~31.46%。
3.4 石灰、青黛的性味与功能：石灰辛、温，有毒；具有燥湿、杀虫、止血、定痛、蚀恶肉之功，内服主治泻痢、崩带。青黛咸、寒；具有清热解毒，凉血，定惊的功能，主治热性病。如石灰含量过高，可能降低了青黛的清热作用及产生对消化道的刺激作用。
3.5 石灰的质量：石灰有生熟之分，生石灰为CaO，熟石灰为Ca(OH)2，如放置陈久，二者的成分都成为CaCO3。Ca(OH)2、CaCO3的溶度积常数(Ksp)分别为5.5×10－6、2.8×10－9，显然后者的Ksp小得多，因此，石灰以新鲜者为佳。
3.6 结论：青黛水飞炮炙是提高靛蓝、减少石灰含量的有效方法。
（张志国,欧阳荣,李康,王成元,王奇成.青黛水飞炮炙方法的研究[J].
中成药,2002,(03):44-46.）