牡丹皮饮片的有效期研究

摘要 目的：进行中药材有效期方法研究。方法：选用易散失气味、易变色的牡丹皮饮片作为研究对象，通过经典恒温实验和留样观察实验，用紫外色谱法测定其其有效成分丹皮酚含量。推导出牡丹皮饮片中丹皮酚含量变化规律。结果：在经典恒温实验中，丹皮酚含量变化符合一级反应规律。牡丹皮在20℃贮存，丹皮酚含量变化速度常数K20℃=1.194×10-4、该批牡丹皮的有效期为226天。经典恒温实验推导的结果与留样观察有效成分含量的变化结果基本一致。结论：用经典恒温实验预测牡丹皮饮片有效期的方法可行，得出有效期结论可靠。

牡丹皮为毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮。具有清热凉血，活血化瘀功能。用于治疗温毒发斑，吐血衄血，夜热早凉，无汗骨蒸，经闭痛经，痈肿疮毒，跌扑伤痛。其主要化学成分：牡丹皮含酚类和单萜类，其中丹皮酚原苷和芍药苷的含量最高，另外还含有挥发油、以及苯甲酸、植物甾醇、蔗糖、葡萄糖、阿拉伯糖等。药理研究证明丹皮酚具有镇静、催眠、抗惊厥、镇痛、解热和降温药理作用；抗血栓形成和抗动脉粥样硬化，抗心律失常，降血压药理作用；免疫增强，抗炎，利尿药理作用。因此丹皮酚是牡丹皮清热凉血、活血化瘀功能的物质基础，为牡丹皮的有效成分。

1 实验仪器与材料

1.1 仪器

超声波清洗器（昆山市淀山湖检测仪器厂）、万分之一电子分析天平（沈阳龙腾电子称量仪器有限公司）、UV-2501PC(日本岛津)

1.2 试剂

甲苯（分析纯），注射用水。

1.3 药物

药材：牡丹皮亘货安徽产，批号为20120301。牡丹皮抢水洗，一小时以后润一次，放置四小时，切薄片，50℃烘干。

2 实验方法和结果

2.1 丹皮酚含量测定

紫外分光光度法（2010版药典法） 取本品粗粉约0.2g，精密称定，用水蒸气蒸馏，收集馏出液约450ml，加水至500ml，摇匀。照分光光度法（2010版药典附录ⅤA）,在247nm的波长处测定吸收度，按丹皮酚的吸收系数为862计算，即得。药典规定本品按干燥品计算，含丹皮酚不得少于1.20%。

2.2 经典恒温试验

牡丹皮饮片样品的制备  取牡丹皮饮片约50g，用普通塑料袋包装封口。置于电热恒温箱中，分别在40℃、50℃、60℃、70℃下保存，选择4个间隔时间。分别为70℃10h、20h、30h、40h；60℃20h、40h、60h、80h；50℃40h、80h、120h、160h；40℃80h、160h、240h、320h。取出用药物粉碎机粉碎成粗粉备用。

牡丹皮含水量测定  依照药典甲苯法，将所用玻璃仪器烘干，取本品粉末20g，精密称定，加无水甲苯200ml，回流至上层液体清亮，读取水的体积，计算含水量。

实验结果：经典恒温实验结果见表1、表2

表1  牡丹皮经典恒温实验结果

温度	时间	取样量(g)	吸收度	丹皮酚百分含量(%)	均含量(%)
初始时间		0.1920	0.691	2.087	2.089
		0.1836	0.662	2.091
40℃	80h	0.1959	0.659	1.951	1.950
		0.1965	0.660	1.948
	160h	0.1978	0.647	1.897	1.900
		0.1969	0.646	1.903
	240h	0.1999	0.625	1.814	1.810
		0.2021	0.629	1.805
	320h	0.2058	0.610	1.721	1.720
		0.2054	0.609	1.719
50℃	40h	0.2047	0.697	1.975	1.970
		0.2049	0.694	1.965
	80h	0.2003	0.652	1.888	1.890
		0.2008	0.655	1.892
	120h	0.2067	0.638	1.790	1.790
		0.2045	0.631	1.790
	160h	0.2074	0.601	1.681	1.680
		0.2062	0.597	1.679
60℃	20h	0.2004	0.692	2.003	2.000
		0.2049	0.705	1.996
	40h	0.2088	0.667	1.907	1.910
		0.1975	0.651	1.912
	60h	0.2016	0.622	1.789	1.790
		0.2103	0.649	1.790
	80h	0.2095	0.615	1.703	1.700
		0.2038	0.596	1.696
70℃	10h	0.2036	0.701	1.997	2.000
		0.1985	0.685	2.002
	20h	0.1968	0.651	1.919	1.920
		0.2033	0.673	1.920
	30h	0.2039	0.640	1.821	1.820
		0.2013	0.631	1.818
	40h	0.2021	0.611	1.754	1.750
		0.2094	0.630	1.745

 

 

表2  经典恒温实验中丹皮酚的含量与时间的关系

温度 (℃)	取样时间(h)	含水量(%)	丹皮酚含量(%)	相对浓度 C(%)	对数浓度LogC	回归结果
40	0	8.82	2.089	100	2.0000	r=-0.9940 a=1.996  b=-2.813×10-4
	80	8.10	1.950	92.58	1.967
	160	7.60	1.900	89.74	1.952
	240	7.21	1.810	85.16	1.930
	320	6.80	1.720	80.53	1.906
50	0	8.82	2.089	100	2.0000	r=-0.9977 a=1.998  b=-6.5×10-4
	40	7.20	1.970	92.67	1.967
	80	6.70	1.890	88.43	1.947
	120	6.30	1.790	83.37	1.921
	160	6.10	1.680	78.09	1.893
60	0	8.82	2.089	100	2.000	r=-0.9988 a=2.001  b=-1.325×10-3
	20	7.40	2.000	94.28	1.974
	40	6.60	1.910	89.26	1.951
	60	5.90	1.790	83.02	1.919
	80	5.51	1.700	78.52	1.895
70	0	8.82	2.089	100	2.000	r=-0.9989 a=2.002  b=-2.580×10-3
	10	8.12	2.177	95.02	1.978
	20	6.30	2.049	89.44	1.951
	30	5.00	1.915	83.63	1.922
	40	3.51	1.814	79.18	1.899

当对数浓度与时间呈线性相关时，即logC＝-kt/2.303 + log Co反应为一级反应。根据b值得出各温度下的速度常数k值。然后根据Arrhenius公式，计算出贮存条件下的速度常数k。

logK对1/T进行回归，求出回归方程：

logk＝-E/(2.303RT) + logA

E为活化能，R为气体常数8.319，A为频率因子（表3）

表3  牡丹皮中丹皮酚含量变化速度常数与温度的关系

t（℃）	1/T ×103	K×104(h-1)	logk	回归结果
40	3.195	6.478	-3.819	r =-0.9996 a=7.780 b=-3429.0
50	3.096	14.97	-2.825
60	3.003	30.51	-2.561
70	2.915	59.42	-2.226

药典规定牡丹皮须置于阴凉处贮存即保存在20℃以下。当温度为20℃时， K20℃=1.194×10^-4。

在20℃下贮存，牡丹皮以干品计算，丹皮酚降至药典规定的最低含量1.2%，经历的时间为226天，即本批产品的有效期为226天。

2.3  留样观察

取牡丹皮饮片50g，用普通塑料袋包装并封口，置于恒温箱中20℃保存，分别于1月、2月、3月、6月、1年后测定样品的含水量和丹皮酚的含量。

牡丹皮留样观察结果与根据速度常数计算出丹皮酚含量比较（表4）

表4  牡丹皮留样观察结果

时间	取样量（g）	吸收度	丹皮酚百分含量（%）	均含量（%）	含水量（%）	干品含量（%）	经典实验推算值
0月	0.1920	0.691	2.087	2.089	8.82	2.291	2.291
	0.1836	0.662	2.091
1月	0.1972	0.659	1.938	1.931	8.85	2.119	2.102
	0.1999	0.663	1.924
2月	0.2163	0.622	1.775	1.777	8.91	1.951	1.929
	0.2087	0.640	1.779
3月	0.2172	0.601	1.605	1.608	8.90	1.765	1.770
	0.2063	0.573	1.611
6月	0.2085	0.459	1.277	1.274	8.99	1.400	1.368
	0.2111	0.462	1.270
1年	0.2004	0.283	0.820	0.822	9.20	0.905	0.817
	0.2210	0.314	0.824

3  讨论

3.1 药材有效期是在一定的贮藏条件下，其有效成分百分含量保持不低于药典规定的期限。牡丹皮饮片20℃贮存，其速度常数为K20℃=1.194×10-4，通过留样观察，计算的结果与实际测量值，0～6月丹皮酚含量二者基本相近，12月二者偏差稍大。在丹皮酚的含量大于1.2%时，其降解符合一级反应，所得速度常数为K20℃=1.194×10-4比较可靠。

3.2 本实验牡丹皮采用塑料袋装每包50g，与小袋分装精制饮片的条件相似，可为其贮藏提供参考，建议牡丹皮切成饮片、制成小剂量包装，不宜贮藏过久，保证在200天左右用完。

3.3 本实验曾尝试用药材牡丹皮亘货做实验，但由于亘货造成的取样误差较大，掩盖了由于温度变化引起的含量改变，因此实验不成功。若用药材粉末作实验，可消除含量不均造成的取样误差，但粉末与实际药材状态相距甚远，并无实际意义。最后选用饮片做实验时，反复多次实验以消除取样误差。

3.4 牡丹皮含有丹皮酚、挥发油，具有特殊的芳香气，除注意严密包装外，应保持贮藏环境干燥阴凉，以免挥发“走气”。由于牡丹皮含苯甲酸，有防腐作用，气味能避虫蛀，故不易遭受虫害。但需防潮，以免发霉、变色。梅雨季前后可行日晒，保持干燥，即能安全贮藏。传统经验证明：牡丹皮若与泽泻同存，可避免其变色，也可防止泽泻生虫。因此亦与其他药材共贮，起防虫作用。

3.5 牡丹皮含有多种成分，以丹皮酚外其他成分作指标，观察其有效期，会有什么样结果，期待进一步实验。