树突状细胞培养及功能检测

树突状细胞是体内最强的抗原呈递细胞，HBV感染后通过DC提呈特异性的病毒抗原，启动T淋巴细胞抗病毒功能的获得性免疫是清除病毒最主要的因素。研究表明，HBV慢性感染患者的树突状细胞功能和乙肝病毒特异性T淋巴细胞免疫应答较正常人和HBV感染后自然恢复患者明显低下，在无症状免疫耐受期患者尤为明显。主要表现在缺乏如急性乙型肝炎和慢性乙型肝炎恢复患者体内强烈的、多克隆的、针对HBcAg和HBeAg的DC抗原提呈和CD4+T细胞及CD8+T细胞应答。以DC为基础的免疫治疗，可能为攻克免疫耐受这一难题的突破口。目前，恢复针对HBV特异性的细胞免疫功能，尤其是特异性的DC和T细胞功能，是慢性乙型肝炎治疗的一个热点和突破口之一。

我实验室针对树突状细胞做了大量的工作。2003-2004年实验室负责人在国外研修期间进行过慢性重型肝炎黄疸证患者的DC功能研究。该研究运用体外培养病人外周血DC，并检测其功能的方法，比较了慢性乙型重型肝炎阳黄证和阴黄证患者的树突状细胞功能，认为慢性乙型重型肝炎阳黄证和阴黄证患者均存在明显外周血DC功能障碍，运用TNF-α激活可提高DC的部分功能，阴黄证患者的外周血DC细胞功能低下较阳黄证患者更为明显。该论文发表在湖南中医药大学学报，2006年第4期上。

我室已承担湖南省卫生厅“HBV慢性感染不同状态患者外周血树突状细胞功能研究”项目。该项目对慢性乙型肝炎免疫耐受期患者、免疫清除期对干扰素有应答患者和免疫清除期对干扰素无应答患者的DC表面分子的表达和对T细胞增殖及分泌IL-12、IFN-γ功能进行检测，研究上述三种不同HBV感染状态与DC表型和功能缺陷的关系。

目前正在承担国家中医药管理局项目“中医不同治法治疗慢性乙型肝炎的特异性细胞免疫学机理研究”、湖南省科技计划重点项目“从肾/脾论治突破HBV感染免疫耐受状态的研究”及湖南省教育厅科研基金“健脾补肾中药对慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞功能的体内、外诱导研究”。

通过以上一系列的研究，为特异性的DC疫苗治疗慢性HBV感染的临床应用提供实验依据，乙型肝炎免疫耐受期患者的治疗有望得到突破。